DNA甲基化是指在DNA甲基轉移酶(DNA methyltransferase, 縮寫(xiě)DNMT)的作用下,在 DNA 鏈中的一個(gè)堿基上添加一個(gè)甲基基團,是一種關(guān)鍵的表觀(guān)遺傳修飾。在哺乳動(dòng)物中,DNA 甲基化主要發(fā)生在胞嘧啶堿基的第五個(gè)碳原子上,形成 5-甲基胞嘧啶或 5-甲基胞嘧啶核苷 (5-mC)。DNA 甲基化幾乎只存在于 CpG 二核苷酸上,是一個(gè)關(guān)鍵的表觀(guān)遺傳標記和基因表達調控因子。DNA 甲基化過(guò)程在一些生物學(xué)現象中起重要作用,例如在高等真核生物中,DNA 甲基化參與調控染色體穩定性、印記、X 染色體失活和癌變等多個(gè)細胞過(guò)程,是生物體重要的表觀(guān)調控機制之一。
全基因組DNA甲基化測序(Whole-genome bisulfite sequencing,WGBS),其原理是用重亞硫酸鹽(Bisulfite) 處理DNA序列,首先將基因組中未發(fā)生甲基化的 C 堿基轉換成 U,從而與原本具有甲基化修飾的堿基C區分開(kāi)來(lái),然后進(jìn)行PCR擴增,結合高通量測序技術(shù),可獲得全基因組范圍內單堿基分辨率的所有DNA甲基化情況,信息最為豐富、全面,繪制全基因組范圍內繪制單堿基分辨率的DNA 甲基化圖譜。
應用方向
干細胞分化:干細胞,無(wú)論是誘導多能干細胞還是胚胎干細胞,都具有非常相似的DNA甲基化修飾特征,干細胞在分化過(guò)程中可能存在表觀(guān)基因組轉化,而不是遺傳轉化。
發(fā)育生物學(xué):在原生殖細胞和胚胎發(fā)育的整個(gè)過(guò)程中,DNA甲基化模式會(huì )發(fā)生全基因組范圍內的重排。DNA甲基化模式改變能引包括染色體狀態(tài)改變在內的一系列變化,進(jìn)而決定細胞分化的方向。維持正常的DNA甲基化模式和甲基化水平,是胚胎正常發(fā)育以及組織特異性分化所必需的。
疾病診斷: WGBS用于檢測相關(guān)基因的異常甲基化 比如腫瘤細胞中,抑癌基因啟動(dòng)子區CpG島被高度甲基化,抑制了抑癌基因的表達,從而導致腫瘤發(fā)生,如急性早幼粒細胞白血病、胃癌等。
技術(shù)優(yōu)勢
1. 測精度高,單堿基分辨率,精確分析每一個(gè)C堿基的甲基化狀態(tài)
2. 檢測范圍廣,實(shí)現全基因組水平上甲基化研究
3. 先進(jìn)的測序平臺,采用DNBSEQ-T7測序平臺,結果更可靠
4. 一站式服務(wù),提供樣品處理、建庫、測序和分析的全套服務(wù),更可以提供多組學(xué)聯(lián)合分析
技術(shù)流程
圖1 WGBS實(shí)驗流程
送樣建議
樣本來(lái)源:人、大鼠和小鼠(其他樣本類(lèi)型請咨詢(xún))
新鮮或凍存組織樣本1 -2g
新鮮或凍存細胞系樣本≥10^7個(gè)cell
DNA總量≥6μg,濃度≥50ng/μL
結果展示
圖2 甲基化C 位點(diǎn)比例分布圖
(不同顏色代表不同context 下甲基化C 位點(diǎn),各部分面積的大小代表相應context 下甲基化C 位點(diǎn)的比例)
圖3 甲基化位點(diǎn)在基因組上的分布
(不同顏色折線(xiàn)代表以10 kb為窗口,窗口內不同甲基化胞嘧啶占該類(lèi)型胞嘧啶的比例)
圖4 差異甲基化區域相關(guān)基因的KEGG通路分析
經(jīng)典案例:Pilocytic astrocytoma demethylation and transcriptional landscapes link bZIP transcription factors to immune response[1].
背景
上皮星形細胞瘤(PA)是最常見(jiàn)的小兒腦腫瘤。盡管已有研究者對基因組和轉錄組水平進(jìn)行了充分的研究,但仍缺乏完整的甲基化組,腫瘤細胞組成和免疫浸潤的數據和研究進(jìn)展。
方法
研究者對 9個(gè)PA 和16個(gè)對照樣品進(jìn)行了全基因組亞硫酸氫鹽測序 (WGBS) 和分析,并整合數據庫的154個(gè)PA和57個(gè)對照甲基化芯片數據。同樣地,也對 49個(gè)PA和11個(gè)對照樣品進(jìn)行轉錄組測序。
結論
WGBS數據的分析顯示,與對照組織相比,PA組織中有9381個(gè)顯著(zhù)差異的甲基化區域(DMR),且DMR的motif分析發(fā)現,這些DMR受到五個(gè)不同的TF家族的增強子和轉錄因子(TF)調控。甲基化和轉錄組數據的反卷積分析表明,與正常組織相比,PA中免疫細胞浸潤具有顯著(zhù)變化。轉錄因子網(wǎng)絡(luò )分析表明, bZIP轉錄因子與參與免疫相關(guān)過(guò)程的基因之間存在調控關(guān)系。作者為甲基化差異、基因表達差異與免疫細胞浸潤之間的關(guān)系提供了關(guān)鍵證據。
圖5 腫瘤低甲基化區域富含增強子和 bZIP 轉錄因子結合位點(diǎn)
參考文獻:Aichmüller, C.F., et al., Pilocytic astrocytoma demethylation and transcriptional landscapes link bZIP transcription factors to immune response. Neuro-Oncology, 2020. 22(9): p. 1327-1338.