免疫印跡（Western Blot）

【技術(shù)簡介】

（1）技術(shù)原理

      蛋白免疫印跡( Western Blot) 是將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，然后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測技術(shù)。蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。

（2）技術(shù)應(yīng)用

      Western印跡法主要用于未知蛋白質(zhì)的檢測及抗原組分、抗原決定蔟的分子生物學(xué)的測定；也可用于未知抗體的檢測和單克隆抗體的鑒定等，同時可用于疾病的早期診斷和預(yù)后的跟蹤分析檢測。

【服務(wù)內(nèi)容】

提取蛋白、測定蛋白濃度、蛋白SDS-PAGE或PAGE凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、抗體雜交、顯色，實驗結(jié)束提供完整的實驗報告，包括實驗方法及免疫印跡的實驗結(jié)果的相關(guān)圖表。

【客戶須知及標本要求】

（1）客戶須明確檢測目的和具體要求，最好能提供1~2篇文獻或資料。

（2）客戶提供的標本需要新鮮或取材后-80℃保存，避免蛋白的降解；標本反復(fù)凍融不得超過2次以上。

（3）如提供組織，需0.5g以上；如提供細胞，細胞數(shù)應(yīng)達到1×10⁶以上。

（4）客戶提供足夠?qū)嶒炗昧康奶禺愋砸豢梗贵w應(yīng)在gnaling technology，Abcam，Cayman Chemical，Santan Cruz，Zymed等知名抗體公司購買保證質(zhì)量。

                                actin 1                                                                       p38