細胞轉染
(1)技術(shù)原理
將外源性基因(載體)轉入細胞內,已成為研究基因與細胞功能的重要手段,目前常用的包括小RNA干預(RNAi)和外源性表達載體轉入兩種手段,二者分別發(fā)揮基因沉默和基因表達的功能,在實(shí)現基因敲除、鑒定基因的生物學(xué)特性、研究基因表達與沉默對于細胞生長(cháng)及相關(guān)因子的影響、研究基因表達的調控機制等方面發(fā)揮重要作用。
轉染的方法較多,有脂質(zhì)體轉染、電穿孔轉染以及病毒感染等,依據轉染持續時(shí)間又分為兩種,一種是瞬時(shí)轉染,外源性DNA不整合到細胞染色體,轉染可以維持24-96小時(shí),用于研究轉染后細胞的功能變化、基因或蛋白的變化等;一種是穩定轉染,外源性DNA整合到細胞染色體,可以持續表達外源性基因,用于穩定細胞株的構建。
(2)技術(shù)應用
隨著(zhù)分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具,在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中,其應用越來(lái)越廣泛。
【服務(wù)內容】
載體構建(或客戶(hù)自備載體);細胞培養與瞬時(shí)轉染;WB和qPCR檢測。
【客戶(hù)須知及標本要求】
1、客戶(hù)須明確檢測目的和具體要求,最好能提供1~2篇文獻或資料。
2、客戶(hù)提供生長(cháng)狀況良好的細胞株,同時(shí)提供細胞特性,培養條件及相關(guān)注意事項;公司也可以為客戶(hù)代購細胞并且提供保種服務(wù);
3、客戶(hù)提供質(zhì)粒,詳細說(shuō)明該質(zhì)粒的大小、濃度、抗性、拷貝數等相關(guān)背景資料。