實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)
(1)技術(shù)原理
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR,qRT-PCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,已廣泛用于基因表達研究、轉基因研究、病原體定量檢測、疾病分類(lèi)及其發(fā)病機理等生命科學(xué)領(lǐng)域。
(2)技術(shù)應用
DNA或RNA的相對定量分析:包括病原微生物或病毒含量的檢測,轉基因動(dòng)植物轉基因拷貝數的檢測;基因表達差異分析:比較經(jīng)過(guò)不同處理的樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)、特定基因在不同時(shí)相的表達差異。
【服務(wù)內容】
RNA抽取與定量;反轉錄;引物設計及熒光定量PCR、數據分析。
(1)客戶(hù)須明確檢測目的和具體要求,最好能提供1~2篇文獻或資料。
(2)提供新鮮樣品,組織樣本:質(zhì)量大于100mg;細胞樣本,細胞數大于106;全血樣本(EDTA抗凝):2~5ml。
(3)提供待測基因的全長(cháng)基因序列或NCBI中的序列號。
(4)提供盡可能詳細的背景資料: DNA/ RNA 來(lái)源、豐度等,如果是cDNA序列請標明外顯子拼接位點(diǎn)。
組織 CDH-1 PCR電泳圖