腫瘤是原癌基因和抑癌基因等在基因組學和表觀遺傳學上發(fā)生改變和逐步累積基因突變引起的疾病，傳統的治療手段為手術、化療和放療，近年來，精準醫(yī)學不斷發(fā)展深化，靶向治療技術也逐步得到推廣和應用。

靶向治療指的是先對腫瘤癌細胞進行基因層面的甄別，找出和正常細胞不同的差異或者變異點，也就是靶點。藥物進入體內后，會尋找并與該靶點相結合，即特異地選擇分子水平上的致癌位點，并與之相結合來發(fā)生作用，從而使腫瘤細胞特異性死亡，而不會波及腫瘤周圍的正常組織細胞。進行靶向藥治療的腫瘤患者，必須要進行腫瘤基因檢測，以找到治療靶點。

目前腫瘤靶向治療的技術，主要依靠全基因組測序（whole-genome sequencing，簡稱WGS）、全外顯子測序（whole?exome sequencing，簡稱WES)、靶向測序（targeted sequencing或panel sequencing）的技術，檢測出DNA水平基因序列的變異，從而鎖定基因，對該基因進行針對性的治療。然而，通過現有技術得到的基因數量以及變異位點比較多，以腦膠質瘤為例，根據從TCGA數據庫下載的包括muse、somaticsniper、varscan、mutect在內的多個分析方法的各90個腦膠質瘤樣品全外顯子測序的結果，與臨床相關的基因數量分別為9361、8679、9391、9794個，其變異位點數分別位20934、18123、21105、22758個。也可根據腫瘤類型和患者人種篩查概率最高的基因，例如非小細胞肺癌患者通常檢測EGFR和ALK基因，但是此種方法存在較大的漏篩風險，不能保證找到所有靶點供醫(yī)生選擇，且一旦開始的檢測未發(fā)現問題，仍然需要做全基因檢測，成本更高且浪費時間。

在MeRIP-seq數據分析過程中，對應的腫瘤樣品的結合峰與對照樣品的結合峰進行比較，篩選出所對應的結合峰具有顯著差異的基因的數量往往在一千個以上，潛在靶基因的甄別和篩選上有比較大的難度。因此，如何更進一步有效快速的檢測出腫瘤靶向治療的靶點，從技術層面上提高潛在靶點的篩選速度成為目前亟需解決的問題。

為了更全面有效的檢測出腫瘤靶向治療的靶點，本發(fā)明使用MeRIP測序技術測定mRNA和lncRNA上的m6A甲基化位點，通過數據處理篩選出相應的基因，基于數據庫的靶標信息及臨床腫瘤相關基因數據進一步篩查，通過motif識別給出腫瘤治療靶點檢測結果（圖1）。在篩選過程中，結合相關性分析、靶標分析及變異數據庫的綜合決策后，可將候選的靶點基因數量篩選范圍縮小到數十個基因以內，并結合臨床腫瘤數據庫進行驗證（圖2），進一步增強了結果的準確性以及全面性。

通過綜合決策篩選出候選基因以及對應結合峰的mRNA區(qū)域的motif的識別，得到基因與結合蛋白的結合序列，將所得結合序列作為腫瘤靶向治療靶點檢測結果。醫(yī)生可以將該檢測結果結合病理臨床檢查結果，作為腫瘤靶向治療給藥的重要參考，在病理的基礎上加上分子診斷的結果，從而進一步深化我們整合式病理的推廣。與此同時，該技術進一步提高潛在靶點篩選范圍的全面性以及準確性，為幫助醫(yī)生更全面地進行患者治療方案制定和規(guī)劃，包括靶向藥物匹配、免疫療效預測、分子分型和預后分析、臨床試驗對接、耐藥應對等方面提供重要的參考。

圖1 技術方案實施流程圖

圖2 腫瘤靶標數據庫