免疫組庫(Immune Repertoire，IR)是指某個(gè)個(gè)體在任何特定時(shí)間點(diǎn)其循環(huán)系統中所有功能多樣性B淋巴細胞和T淋巴細胞的總和。T細胞和B細胞分別介導機體的細胞免疫和體液免疫應答，分別通過(guò)其表面的T細胞受體（TCR）和B細胞受體（BCR）來(lái)識別和結合抗原，進(jìn)而發(fā)揮功能清除病原體或體內腫瘤細胞。免疫組庫是機體免疫系統的完全反映，對免疫組庫分析，可以全面評估機體的免疫狀態(tài)。

免疫組庫測序應用

免疫組庫的全面測序為免疫組庫多樣性變化特點(diǎn)的生物標志物發(fā)現、腫瘤等疾病療效預測、疾病的易感性和抵抗性、感染性疾病及疫苗研究等方面帶來(lái)重要進(jìn)展。其中，在癌癥疫苗單獨用于微小殘留病的治療方面，通過(guò)探索阻滯免疫檢測點(diǎn)或運用免疫刺激劑的方式應用于轉移性疾病的治療，嘗試多種聯(lián)合方式，如化療藥物+疫苗、疫苗+生物標志物、疫苗+IL微粒、疫苗+佐劑等，最終設計優(yōu)化出能夠取得長(cháng)期臨床效應的集成免疫治療方案。例如，在微小殘留病檢測方面，白血病治療后，常有微小殘留病，流式細胞術(shù)基本檢測不到。利用高通量測序分析免疫組庫監控，對比正常人群的免疫組庫和白血病病人的免疫組庫序列，通過(guò)大數據分析找出白血病相關(guān)致病克隆，可以相對精確地判斷出病人體內白血病細胞數量，從而及時(shí)指導白血病的臨床治療及用藥。
免疫組庫高通量測序是通過(guò)多重PCR或5′RACE法擴增TCR/BCR全長(cháng)或CDR3區序列（主要是TCR的β鏈或BCR的重鏈），再結合高通量測序技術(shù)，對機體免疫組庫的多樣性及每種T、B細胞克隆的獨特性序列組成和變化進(jìn)行分析，從而全面評估機體的免疫狀態(tài)，明確疾病與T、B細胞克隆組成及變化之間的關(guān)系。免疫組庫高通量測序技術(shù)強大的信息通量可大大提高抗原特性異TCR和BCR鑒別的效率和準確性，結合免疫組庫高通量測序技術(shù)的特異性TCR/BCR鑒別技術(shù)必將得到廣泛應用和快速發(fā)展，并大大提速免疫治療領(lǐng)域的進(jìn)展。
廣州華銀健康科技有限公司腫瘤精準醫療高通量測序公共服務(wù)平臺，圍繞腫瘤精準醫療開(kāi)發(fā)出了系列針對實(shí)體瘤藥物靶標基因檢測、遺傳性腫瘤基因檢測、血液腫瘤分子病理檢測、腫瘤基因組檢測、循環(huán)腫瘤DNA檢測、免疫組庫（TCR、BCR）高通量測序及分析等項目研發(fā)技術(shù)流程，并建立對應的技術(shù)流程及實(shí)驗室質(zhì)量標準化管理體系，定期開(kāi)展國家衛計委室間質(zhì)評活動(dòng)。

服務(wù)包括：
1）測序數據質(zhì)量評估：去除原始數據（raw data）中的無(wú)效序列，獲得有效測序數據（clean data）
2）克隆的鑒定與計數：與IMGT數據庫比對，確定V、D、J基因片段，并對克隆進(jìn)行鑒定，去除組庫擴增及高通量測序過(guò)程中引入的錯誤序列，對得到的可信序列計數，并以EXCEL表格的形式提供給研究者（如表1），便于研究者結合項目的臨床數據進(jìn)行深入的分組分類(lèi)統計分析，如比較疾病組與對照組V、J等基因種類(lèi)組成的差異。

表1. 文庫測序結果分類(lèi)計數

3）不同V/D/J基因使用頻率：對每個(gè)樣本中鑒定到的V、D、J基因進(jìn)行計數和頻率的計算并繪圖（如圖1），統計分析找出頻率上有顯著(zhù)差異的V、D、J基因，并以EXCEL表格的形式提供給研究者，便于進(jìn)一步分類(lèi)統計分析。

圖1. V基因使用頻率

4）不同V/D/J基因組合頻率：對每個(gè)樣本中鑒定到的V和J基因組合以及V、D和J基因組合進(jìn)行計數和頻率的計算，統計分析找出頻率上有顯著(zhù)差異的V和J基因組合以及V、D和J基因組合，并以EXCEL表格的形式提供給研究者（如下圖），便于進(jìn)一步分類(lèi)統計分析。

表2.V和J基因組合

表3.V、D和J基因組合

5）獨特克隆型頻率：對每個(gè)樣本中鑒定到的獨特克隆型（unique clonotype）CDR3核苷酸及氨基酸序列進(jìn)行計數和頻率的計算，并以EXCEL表格的形式提供給研究者（表1），便于研究者結合樣本的臨床數據進(jìn)行深入的分組分類(lèi)統計分析，如獨特CDR3克隆型數量的差異、獨特克隆型數量與臨床資料包括年齡性別等的差異等。對每個(gè)樣本獨特CDR3克隆所占百分比頻率繪圖，統計前5個(gè)最高頻率克隆所占比例（圖2）。

圖2.獨特CDR3克隆所占百分比頻率

6）CDR3長(cháng)度分布：對每個(gè)樣本中鑒定到的獨特克隆型，分析其CDR3氨基酸的長(cháng)度分布（圖3）。

圖3.CDR3氨基酸的長(cháng)度分布

7）樣本間CDR3氨基酸序列的相關(guān)性、相似性和多樣性評估：根據樣本間獨特CDR3氨基酸序列計算樣本間文庫的相關(guān)性和相似性（圖4），評估比較樣本組間獨特CDR3克隆多樣性差異（圖5）。

圖4.樣本間文庫的相關(guān)性

圖5.樣本組間獨特CDR3克隆多樣性差異

8）樣本間共有克隆分析：根據樣本間獨特CDR3氨基酸序列計算樣本共有VDJ基因組合及CDR3氨基酸序列的數量和比例（圖6、7、8）。

圖6.同一患者不同部位樣本V/D/J基因組合的共有克隆及所占比例

圖7. 同一患者不同部位樣本CDR3氨基酸序列共有克隆及所占比例

圖8.全部樣本中CDR3氨基酸序列共有克隆及所占比例

華銀免疫組庫高通量測序及分析技術(shù)優(yōu)勢：
1）由武漢大學(xué)、中山大學(xué)、南方醫科大學(xué)以及美國斯坦福大學(xué)研究人員組成的專(zhuān)業(yè)的研究和分析團隊，保證研究結果的可信度和可重復性；
2）用免疫組庫擴增最可靠的5′RACE法，保證結果的可靠性和后期研究的方便性；
3）用最優(yōu)選最可靠的擴增和建庫試劑，保證組庫序列擴增的保真性和擴增效率；
4） 針對不同樣品類(lèi)型（細胞、組織、全血），不同濃度梯度細胞數（100個(gè)以上淋巴細胞）均可建庫測序；
5） 運用國際認可的專(zhuān)業(yè)的免疫組庫分析模塊，并結合我們自己獨有的生物信息分析算法，所提供的標準化的分析流程即可滿(mǎn)足科研或臨床所需。另外我們還可提供數據的深度分析服務(wù)；
6） 根據項目研究目的不同，可選擇不同的測序平臺（MiSeq或HiSeq）和策略，從而節約經(jīng)費，得到最滿(mǎn)意的性?xún)r(jià)比；
7） 可提供外周血單個(gè)核細胞（PBMC）的分離、特異性淋巴細胞的分選；
華銀高通量測序服務(wù)平臺自是廣東省唯一一家擁有豐富醫學(xué)背景提供科研高通量測序服務(wù)的企業(yè)。平臺已獲得CNAS ISO15189醫學(xué)實(shí)驗室國際質(zhì)量認可、美國CAP實(shí)驗室認可，不僅可以提供可靠的測序數據，還可以量身定做的數據分析服務(wù)，為醫學(xué)科研疾病研究提供全方位服務(wù)，從上游的高通量篩選和下游的基因分子機制功能研究甚至到臨床轉化的合作，我們都可以參與提供貼心周到的服務(wù)。
目前華銀高通量測序服務(wù)平臺為推進(jìn)免疫組庫的臨床項目的研發(fā)與轉化應用，為推動(dòng)精準醫學(xué)、醫學(xué)檢測外包服務(wù)及相關(guān)醫療產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供技術(shù)支持，對免疫組庫測序服務(wù)提供買(mǎi)三送一活動(dòng)，即向華銀送檢測序分析三個(gè)樣品，免費獲贈一個(gè)樣品服務(wù)。截止時(shí)間為7月30日。 服務(wù)詳情咨詢(xún)：董老師 020-38917464。

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